技术分享丨丁酸梭菌培养物（克乐奈斯）对养殖常见病原菌的抑菌效果
发布时间：
2025-03-25
01实验目的验证丁酸梭菌培养物（克乐奈斯）对常见病原菌的抑菌效果。
1、实验器材：电子天平、恒温培养箱、灭菌锅、超净工作台、游标卡尺、移液枪(1mL、200μL)、试管、锥形瓶、培养皿（90×90mm）、枪头(1mL、200μL)、医用棉签等。培养皿、枪头、离心管、棉签等需灭菌备用。
2、培养基：营养琼脂（NA）。
3、指示菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌ATCC6538、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）。
4、待测样品：3个生产批次的丁酸梭菌培养物克乐奈斯，批次号分别为YL-04-24-0716、2024-0620-102、20240701，本实验中为了方便将其统一编号依次为1、2、3。
3个生产批次的克乐奈斯产品分别按照1:4比例和超纯水水混合，涡旋振荡2min混合均匀备用。
1、指示菌准备：大肠杆菌、沙门氏菌菌株、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌接种于营养琼脂斜面培养基试管中，产气荚膜梭菌接种于梭菌强化琼脂培养基中，37℃过夜培养，取10ml生理盐水加入培养好的试管中洗脱大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌制备菌液，此时菌液中指示菌含量约为108CFU/ml。培养好的产气荚膜梭菌不做稀释直接待用。
2、操作步骤：于超净工作台中无菌倾注营养琼脂培养基和强化梭菌琼脂平板，待平板冷却后用无菌棉签蘸取指示菌均匀涂布于平板上，然后用1 mL枪头（外径：9mm）在平板上打孔，火焰封底备用。吸取150μL待检样液加入到相应孔内。将加过样液的培养皿放入4℃的冰箱中扩散3~4h后移入37℃培养箱中培养6～8h。测量记录平板中的抑菌圈直径，判断待测样品的抑制增殖效果。
实验数据表明，3个不同生产批次的丁酸梭菌培养物（克乐奈斯）产品对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌均表现出不同程度的抑制增殖作用，抑菌圈清晰，抑制有害菌增殖效果明显，其中对金黄色葡萄球菌的抑制增殖能力最强。
图1:不同生产批次克乐奈斯产品抑菌圈直径图片
（实验数据来源于金百合生物内部检测报告）
丁酸梭菌培养物克乐奈斯产品表现出较强的抑菌能力，对养殖常见病原菌的抑菌效果明显。
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