01实验目的评估丁酸梭菌与植物精油对常见病原菌的抑菌能力及植物精油与丁酸梭菌能否配伍使用。
1、样品准备：丁酸梭菌发酵液、丁酸梭菌、香芹酚、百里香酚、肉桂醛
2、病原菌：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌
3、培养皿直径9cm、试管18*180mm、高压灭菌锅、无菌水、1mL移液枪（带枪头）、移液枪0.2mL（带枪头）、天平、量筒、涂布棒、棉线或橡皮筋、牛皮纸、恒温培养箱。
1、精油对丁酸梭菌最小抑菌浓度（MIC）试验：
丁酸梭菌发酵液稀释100倍。取96孔细胞培养板每横排中加入100μL含2%吐温80试剂强化梭菌培养基，在每横排第一孔中加入100μL精油样品，混匀后吸取100μL稀释液至第二孔中，依次类推，最后一孔混匀后吸取100μL弃去。每个样品做一个重复。设置阴、阳对照。37℃厌氧培养16-20h，取出观察结果。
2、丁酸梭菌BD11原液和精油抑制病原菌试验：
3种精油样品用2%吐温80试剂强化梭菌培养基稀释至20μL/mL（2%），病原菌原菌液稀释100倍至106CFU/mL，用无菌棉签蘸取菌液均匀涂抹在营养琼脂培养基中，用1mL枪头在培养基表面打孔，加入200μL稀释好的精油样品，过夜培养，取出观察结果。
1、植物精油对丁酸梭菌最小抑菌浓度
图表1：精油对丁酸梭菌最小抑菌浓度
从图表1可知，百里香酚、肉桂醛和香芹酚对丁酸梭菌的最小抑菌浓度分别7.8μL/mL、0.2μL/mL和2μL/mL。
2、丁酸梭菌BD11原液和植物精油对病原菌的抑菌效果
图表2：丁酸梭菌BD11原液和精油对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
图表3：丁酸梭菌BD11原液和精油对沙门氏菌的抑菌效果
图表4：丁酸梭菌BD11原液和精油对大肠杆菌的抑菌效果
图表5：丁酸梭菌BD11原液和精油对病原菌的抑菌效果
从试验结果可知，精油浓度稀释至20μL/mL（2%）时，百里香酚对大肠杆菌、沙门氏菌没有抑菌效果；香芹酚、肉桂醛、丁酸梭菌BD11对三种病原菌均有抑菌效果，其中抑菌效果丁酸梭菌BD11>肉桂醛>香芹酚>百里香酚。
1、丁酸梭菌BD11对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌效果优于三种精油；
2、三种精油均对丁酸梭菌存在抑制作用，实际生产应用中应避免配伍使用；
3、精油浓度稀释至20μL/mL（2%）时，肉桂醛对三种病原菌均有显著的抑菌作用；香芹酚对金黄色葡萄球菌抑菌明显，而对沙门氏菌和大肠杆菌抑菌能力较弱；百里香酚对三种病原菌的抑菌能力均较弱。
金百合生物简介：
金百合生物成立于2013年，是一家专注于丁酸梭菌及其衍生物研发、生产、销售为一体的高新技术企业。公司多年来围绕着生物技术领域，致力于发酵微生态制剂的研发，依托农业部微生物产品质量监督检验测试中心、农业微生物学国家重点实验室等科研平台，搭建了高稳丁酸梭菌、功能性丁酸梭菌、丁酸梭菌培养物等技术研究应用推广平台。
金百合生物定位于“做最具价值的微生态”，提出了“设计有价值的模式、制造有价值的产品、提供有价值的服务”为全新的经营理念。以“让微生态为养殖提供价值”为指导思想，让微生态的价值看得见、算得出、摸得着。已荣获国家专精特新“小巨人”、国家高新技术企业、河南省制造业单项冠军企业、河南省“瞪羚”企业、河南省科技小巨人培育企业等荣誉称号。
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