南美白对虾肠道粘膜屏障的构成及丁酸梭菌,黄曲霉毒素,副溶血弧菌对南美白对虾肠道结构的影响分析
- 分类:技术文章
- 作者:河南金百合生物
- 来源:
- 发布时间:2022-08-05 14:51
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南美白对虾肠道粘膜屏障的构成及丁酸梭菌,黄曲霉毒素,副溶血弧菌对南美白对虾肠道结构的影响分析
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南美白对虾肠道不仅是营养物质消化和吸收的重要场所,也是其重要的免疫器官,是免疫的第一道防线,其屏障功能可分为机械屏障、化学屏障、免疫屏障、微生物屏障四类。
一、南美白对虾肠道粘膜屏障
1.机械屏障:
由肠道上皮细胞及细胞间连接构成,包括紧密连接、粘附连接、桥粒连接、缝隙连接。其中紧密连接形成肠上皮细胞渗透性屏障,肠道病原物质破坏细胞紧密连接,增加肠道通透性,以降低肠道抗病能力。
2.化学屏障:
由肠道上皮细胞表面黏液层构成,南美白对虾肠道中存在“围食膜”,由蛋白质(消化酶、免疫相关蛋白、抗氧化蛋白、几丁质酶等)、几丁质、多糖构成网状结构,围食膜不仅能够辅助消化吸收,还能保护肠道免受饲料颗粒及病原微生物侵害。研究表明,南美白对虾受WSSV、弧菌等感染后,部分免疫蛋白基因表达上调。
3.免疫屏障:
以先天性(或非特异性)免疫为主,无脊椎动物识别受体包括:肽聚糖识别蛋白(PGRPs),革兰氏阴性菌结合蛋白(GNBPs)或脂多糖与 β-1,3-葡聚糖结合蛋白(LGBPs),C 型凝集素(C-type Lectins,CTLs),半乳糖凝集素(galectins),含硫脂蛋白(TEPs),纤维蛋白原相关蛋白(FREPs),清道夫受体(SRs),唐氏综合征细胞粘附分子(DSCAMs)及 Toll样受体(TLRs)为主。Yang et al等在研究中发现TLRs参与抵御弧菌和WSSV免疫响应。此外活性氧(ROS)与抗菌肽(AMPs)也同样参与免疫屏障。
4.微生物屏障:
通常指肠道内正常的共生菌群,可与病原菌竞争粘附位点、营养等,还参与调节先天性免疫反应,其生命活动的代谢产物还能调控肠道益生菌菌群丰度。南美白对虾的免疫活动和生存环境的改变会改变肠道正常菌群的结构。
二、黄曲霉毒素B1对肠道结构的影响
黄曲霉毒素15mg/kg添加量,攻毒12d
攻毒第4d肠道上皮细胞与基膜间出现间隙,部分细胞核边缘模糊,8-12d肠道上皮细胞出现细胞核肥大,细胞间隙模糊,上皮细胞层与基膜分离。说明黄曲霉毒素B1对凡纳滨对虾肠道黏膜造成了机械损伤,即在一定程度上破坏了其肠道的物理屏障,进而可能影响肠道其他功能。
三、副溶血弧菌对肠道结构的影响
副溶血弧菌浓度5×10∧7 CFU/ml,攻毒12h
感染副溶血弧菌后,肠道上皮细胞与基膜分离,上皮细胞细胞核肥大,核边缘模糊不清。
透射电镜观察可见感染副溶血弧菌细胞顶端间隙变大,细胞间连接破坏,界限模糊,但围食膜依旧存在(图 3.12-C,D);部分细胞的细胞核形态改变,出现细胞核固缩、染色体成簇聚集在核膜周围的现象,溶酶体出现在细胞核附近(图 3.12-E);部分细胞微绒毛脱落,且有变成球形的趋势,细菌进入细胞内被囊泡包裹,细胞内部出现空洞,有凋亡小体出现(图 3.12-F)。
四、丁酸梭菌对肠道结构的影响
分别用丁酸梭菌活菌(LS)、丁酸梭菌喷雾干燥芽孢(DS)、破碎丁酸梭菌(CE)、丁酸梭菌发酵上清液(FS)、丁酸梭菌活菌+代谢物(LCS)六种形式处理对虾肠道42d
可见DS、LC、LCS组对对虾肠道肠绒毛高度和肠壁厚度均有显著提升
此外副溶血弧菌攻毒14d发现,DS、LC、LCS、CE组死亡率低于对照组
DS、LC、LCS组对虾肝胰腺中proPO基因表达明显高于对照组,说明这三组处理在南美白对虾抗病原菌侵袭过程中起到了重要作用。FS、DS、LC、LCS组LZM基因表达量显著提升,说明这几组处理在免疫酶表达中起到重要作用。DS、LCS组SOD基因表达量显著升高,SOD可以消除宿主体内在温度、缺氧、pH、毒物和病原体胁迫下产生的活性氧,以维持细胞稳态。
综上所述:丁酸梭菌对于维持南美白对虾肠道结构完整性具有重大价值,丁酸梭菌芽孢、活菌和上清液的混合物均可以作为有效的免疫刺激物质,产生proPO、LZM和SOD,保护虾免受病原体的侵害。
参考文献:
《凡纳滨对虾肠道黏膜屏障对黄曲霉毒素 B1 和副溶血弧菌 E1 的响应 》
《Effect of Clostridium butyricum in different forms on growth performance,disease resistance, expression of genes involved in immune responses and mTOR signaling pathway of Litopenaeus vannamai》
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